면역 억제제 Mizoribine의 혈액 농도를 에볼루션 바카라하기위한 효소 개발

Genome Factory Research Division [Research Division, Yoshikawa Hiroyuki 이사] (이하 "AIST"라고 함), Genome Factory Research Division [Kamagata Yoichi의 연구 부서], Tamura Guhiro의 Gene Expression Engineering Research Group 이사, Asahi Kasei Pharma Co, Ltd, Ltd, Ceo indada indade indade와 공동 작업면역 억제제사용Mizoribin(MZR)의 혈액 농도를 에볼루션 바카라하는 데 사용할 수있는 효소 (미조 리빈 포스 포에나 제)를 발견하고 효율적인 생산 방법을 개발했습니다

Mizoribine은 신장 이식의 거부 반응을 억제합니다Lubos 신염・류마티스 관절염등과 같은 처리에 널리 사용되는 저 분자량 화합물 (Molecular Weight 259)이지만, 미소 비빈의 효과와 치료의 안전성을 보장하기위한 최적의 수량에 관한 알려지지 않았으며, 각 개별에 대한 최적의 용량을 이해하기 위해서는 혈액 농축을 조정하는 것이 필요하다는 것을 지적했다

현재, 미조 리빈의 혈액 농도는 고성능 액체 크로마토 그래피 (HPLC)로 에볼루션 바카라 할 수 있지만 시간과 노력이 필요합니다 이번에 개발 된 효소를 사용하면 짧은 시간 안에 간단한 에볼루션 바카라을 수행 할 수 있습니다 이 기술의 세부 사항은 일본 임상 실험실 의학 협회의 제 55 차 학술 회의에서 발표 될 예정이며, 2008 년 11 월 27 일부터 30 일까지 나고야 국제 의회 센터에서 개최 될 예정입니다

이시기에 발견 된 미조 리바 인 포스 포에나 제를 사용한 미생물 농도를 에볼루션 바카라하는 원리

NAD+: 산화 코엔자임, NADH : 감소 된 코엔자임 두 번째 반응에서 생성 된 NADH의 농도는 340 나노 미터의 파장에서 흡광도로부터 쉽게 에볼루션 바카라 할 수 있으므로, 미사 리빈의 농도를 계산할 수있다

Mizoribine (MZR)은 신장 이식에서 거부 반응을 억제하는 데 널리 사용되는 소분자 중량 (분자량 259)으로, 루푸스 신염, 류마티스 관절염 등을 치료하는 데 널리 사용됩니다 Mizoribine은 유사한 약물을 보이는 다른 약물에 비해 백혈구와 같은 혈액 시스템 장애가 적지 만 주로 신장에서 배설되므로 신장 손상이있는 환자에서 배설이 지연됩니다골수 기능 억제와 같은 심각한 부작용 발생할 수 있습니다 따라서 최근 몇 년 동안 혈액 농도를 에볼루션 바카라하여 복용량을 조정해야한다는 것이 지적되었습니다

현재, 미조 리빈의 혈액 농도는 고성능 액체 크로마토 그래피 (HPLC)에 의해 에볼루션 바카라 될 수있다 그러나 HPLC 에볼루션 바카라에는 (i) 장비가 제한된 수의 시설에만 배치되고 (ii) 시편의 사전 처리가 필요하며 (iii) 에볼루션 바카라에는 시간이 걸리고 여러 시편을 동시에 에볼루션 바카라 할 수 없으며 (iv) 필요한 샘플의 양은 다른 혈액의 분석보다 더 높습니다 (적어도 08 밀리터) 따라서, 짧은 시간에 간단한 에볼루션 바카라을 달성하기 위해서는 일반적인 자동 분석기를 사용하여 에볼루션 바카라 할 수있는 불균형의 혈액 농도를 에볼루션 바카라하는 방법을 개발할 필요가있다

Gene Expression Engineering Research Group, AIST, Genomic Factory Research Division,Rhodococcus actinomycetes(Rhodococcus erythropolis)를 사용하여 화학 및 단백질 생산 시스템 구축에 대한 연구를 수행하고 있습니다 특히Actinomycetes를 사용한 단백질 생산 기존 기술 인 E coli에서 생산하기 어려운 단백질의 생산을 가능하게하는 것이 특징입니다 한편, Asahi Kasei Pharma Co, Ltd의 진단 제품 부서는 효소를 사용하여 진단 효소 및 진단 약물을 개발하고 있습니다 따라서 AIST는 Rhodococcus actinomycetes를 사용하여 진단 효소를 제조하는 기술을 개발하기 위해 Asahi Kasei Pharma Co, Ltd와 협력하여 일하고 있습니다

이 기술을 사용하여 Misoribin 농도를 에볼루션 바카라하는 원리는 그림과 같이 두 가지 반응으로 구성됩니다 1

그림 1 : 이번에 발견 된 미조 리바 인 포스 포에나 제를 사용한 미사리 빈 농도를 에볼루션 바카라하는 원리

NAD+: 산화 코엔자임, NADH : 감소 된 코엔자임 두 번째 반응에서 생성 된 NADH의 농도는 340 나노 미터의 파장에서 흡광도로부터 쉽게 에볼루션 바카라 할 수 있으므로, 미소리 빈의 농도를 계산할 수있다

첫 번째 반응에서, 인산염은 미조 리빈 포스 포에나 제의 작용에 의해 미조 리빈에 결합되어 미조 리빈 5'- 모노 포스페이트 (MZR-P)를 형성한다 이 mzr-p는Imp Dehydrogenase두 번째 반응에서, MZR-P 농도, 즉 불 오리 빈의 농도는 억제 정도를 에볼루션 바카라함으로써 계산된다 효소 IMP 탈수소 효소는 화합물 IMP (이노신 모노 포스페이트)를 화합물 XMP (크 산토신 모노 포스페이트)로 전환시키는 효소이며, 이때 화합물 NAD⁺(코엔자임 산화 형태)는 화합물 NADH (Coenzyme 환원 형태)가됩니다 NADH의 농도는 340 나노 미터의 파장에서 흡광도를 에볼루션 바카라함으로써 쉽게 에볼루션 바카라 할 수있다 이것은 IMP 탈수소 효소의 효소 활성의 억제 정도를 계산하고, 미조 리빈의 농도는 MZR-P의 농도로부터 계산된다

첫 번째 단계에서 Misoribin을 인산화하는 효소는 인간 생체 내에서 어떤 효소가 자신의 역할을하는지 알려지지 않았으므로, 게놈 정보가 등록 된 데이터베이스에서 예측 된 유전자가 검색되었다 다수의 후보 유전자는 대장균에서 재조합 단백질로서 발현되었고, 생성 된 단백질이 미조 리빈을 인산화하는 능력이 있는지 여부를 검색 하였다 그러나, 이들 효소가 대장균에서 생산 될 때, 생성 된 효소는 세포 내에서 핵산 및 인산화 된 핵산의 농도를 방해하여 종종 사망으로 이어져 대장균이 죽게되며 검색은 진행되지 않았다

그래서 Aist의 Rhodococcus actinomycetes (Rhodococcus erythropolis)를 사용하면 박테리아를 죽이지 않고 쉽게 검색 할 수있었습니다 다양한 미생물로부터의 효소 유전자는이 액티 브노 마이 세트에서 발현되었다 결과적으로, 미로 리빈을 인산화하는 효소 유전자가 발견되었다 또한,이 유전자를 사용하여 Actinomycetes에 의해 Misoribin을 인산화하는 효소를 생성하는 효율적인 방법이 개발되었다 상세한 분석 후,이 효소는 박테리아에서 발견 된 최초의 핵산 포스 포에나 제였다 (Nucleoside kinase12430_12462

이 효소를 사용하여 Mizoribine의 혈액 농도를 에볼루션 바카라하기위한 효소 적 방법을 개발 하였다 도 2는 첫 번째 반응 에서이 효소에 의해 야기 된 인산화 반응의 HPLC 분석 결과를 보여준다 반응이 진행된 이후, 미 반응 ATP 및 Mizoribin은 남아 있었지만 ATP는 ADP로 변경되었고 Mizoribin이 MZR-P로 전환 된 것으로 확인되었다 이 첫 번째 반응은 5 분 안에 완료됩니다

그림 2 : HPLC에 의해 분석 된이 효소 (첫 번째 반응의 확인)에 의한 불균형의 인산화 반응

첫 번째 반응 반응은 두 번째 반응 테스트 솔루션 (IMP 및 NAD⁺및 IMP 탈수소 효소) 및 두 번째 반응을 수행하고, 340 나노 미터의 파장에서의 흡광도를 에볼루션 바카라 하였다 IMP 탈수소 효소의 효소 활성의 억제 정도를 흡광도로부터 계산하고, MZR-P 및 Misoribine의 농도를 계산 하였다 결과적으로, 농도 에볼루션 바카라은도 1에 도시 된 바와 같이 HPLC를 사용한 결과를 초래한다 3 혈액에 존재하는 미사리 빈의 농도를 정확하게 에볼루션 바카라 할 수 있음을 확인하십시오

그림 3 효소 방법에서 혈액 농도 에볼루션 바카라 결과와 HPLC 방법의 비교

현재 Mizoribine 혈액 농도 에볼루션 바카라은 샘플 전처리 시간을 제외하고 HPLC 에볼루션 바카라을 에볼루션 바카라하는 데 18 분이 필요하며 시간당 33 개의 시편 만 에볼루션 바카라 할 수 있습니다 미조 리빈의 혈액 농도를 에볼루션 바카라하기 위해이 효소 적 방법을 사용하여, 다수의 시편은 일반 목적 생화학 자동 분석기를 사용하여 동시에 에볼루션 바카라 할 수 있으며, 시간당 600 개의 표본을 에볼루션 바카라 할 수있게한다 (일반적인 생물학적 자동 분석기, Hitachi 7080 자동 분석기)

이 연구 결과에 기초하여, AIST는 MZR (Mizoribine)과 Asahi Kasei Pharma Co, Ltd를 인산화하는 뉴 클레오 시드 키나제의 기능적 분석을 발전시킨다

◆ 면역 억제제

자가 면역 질환에서 장기 이식 및 비정상 면역 반응에서 거부를 억제하는 데 사용되는 약물[참조로 돌아 가기]

◆ Mizoribin (MZR :Mizoribine)

신장 이식, 루푸스 신염 치료 및 류마티스 관절염 치료에서 거부 반응을 억제하기위한 면역 억제제로 널리 사용되는 소분자 화합물
분자식 C₉H₁₃n₃O₆　 분자량 25922

 

효소는이 시간을 발견했다[참조로 돌아 가기]

◆ 루푸스 신염

핵 성분을 항원으로 사용하는 콜라겐 질환 중 하나 및 면역 복합체 사구체 신염 중 하나 인 전신성 홍 반성 루푸스의 신장 합병증[참조로 돌아 가기]

◆ 류마티스 관절염

관절이 염증을 일으키고 고통스러워하는 질병 염증성자가 면역 질환[참조로 돌아 가기]

◆ 골수 기능 억제

골수에서 조혈 세포를 생산하는 능력 감소 감염이나 출혈을 유발할 수 있습니다[참조로 돌아 가기]

◆ Rhodococcus actinomycetes

ActinomycetesRhodococcus| 그것은 Rhodococcus 속으로 분류 된 박테리아이며, 유전자의 기본 서열에 기초한 분자 계통 발생학에 기초하여 약 40 종으로 더 분류된다 Rhodococcal actinomycetes (Rhodococcus erythropolis)는 약 4 ° C ~ 35 ° C의 광범위한 온도에서 자랄 수 있으며 유기 용매에 저항력이있는 특징이 있습니다 같은 종들 사이에서, 많은 박테리아는 분해하기 어려운 환경 오염 물질에 대한 분해가있는 박테리아를 포함하여 다양한 능력으로 발견되었습니다 재료 생산의 관점에서 볼 때, 그것은 범용 화학 물질 (아크릴 아미드)의 생산 및 실제 적용에서 세계 최초의 성공적인 미생물로도 알려져 있습니다[참조로 돌아 가기]

◆ Actinomycetes

Actinomycetes는 안료로 박테리아를 염색하고 분류하는 방법을 사용할 때 염색하여 염색하여 염색되는 곰팡이 (그람 양성 박테리아)로 분류되며, 세포 (신체를 구성하는 필라멘트 구조)를 형성하는 특성을 나타내는 특성을 나타냅니다 이 이름은 균사가 방사상으로 뻗어 있기 때문에 주어졌지만, 유전자 뉴클레오티드 서열에 기초한 현재 분자 계통 발생에서 형태만으로 특성화하는 것은 더 이상 어렵지 않다 대부분의 항생제 생산 박테리아는 액티 원근체에 속합니다[참조로 돌아 가기]

◆ 이노신 5'-monophosphate dehydrogenase (Imp Dehydrogenase)

이노신 5'- 모노 포스페이트를 크 산토신 5'- 모노 포스페이트로 전환시키는 효소[참조로 돌아 가기]

◆ 뉴 클레오 시드 키나제

뉴 클레오 시드를 인산화하는 효소[참조로 돌아 가기]