바카라 커뮤니티 (Nomaguchi Ari 회장) (이하 "AIST")바카라 룰코 실화 공학 센터Narimatsu Hisashi Research Center Director (및) 당 단백질 분석 팀원 연구팀, 바카라 룰코 단백체 분석 팀 Kaji Hiroyuki 리서치 팀 책임자 연구팀, Lectin 응용 프로그램 팀 Kuno Atsushi Atsushi의 수석 연구원, Molecular Medical Development Joru 연구 팀 Mizogami Masegami, Mistami Masemi의 이사 및 MasaMi MasaMi의 이사 Nagoya City University의 Nagoya City University의 국제 의료 센터 인 Kokufudai Hospital의 면역학 연구 센터와 Nagoya City University의 의과 대학원 타나카 야스토 교수는 간의 병리를 측정 할 수있는 검사 시스템을 성공적으로 개발했으며, 이는 몇 년에 걸쳐 변하기 바이러스에 대한 지속적인 감염으로 인해 시간이 지남에 따라 변한다
이 연구 결과는 이전에 실험실 입원이 필요한 B 형 간염 또는 C 바이러스에 감염된 환자에 대한 치료 후 장기 진단, 치료 및 추적 관찰과 관련된 신체적, 경제적 부담을 줄일 것으로 예상된다 이 연구의 결과에 대한 자세한 내용은 68 번째 일본 암 협회에서 10 월 1 일부터 3 일까지 요코하마에서 개최 될 예정입니다
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바카라 룰 칸 분석 기술을 사용하여 암 간염의 진행을 평가 |
만성 간염 진단 및 치료 과정에서 간염 바이러스에 대한 지속적인 감염으로 간장이 진행됩니다섬유증의 정도를 결정해야하며, 간의 조직 병리학 적 검사 (생검)가 종종 수행됩니다 생검 검사는 신체 외부에서 간에 삽입 된 바늘을 사용하여 간 조직을 수집하여 수행되므로 출혈의 위험과 큰 신체적 부담이 있습니다 또한이 시험에는 약 일주일 동안 입원이 필요하며,이 기간 동안 사회 및 경제 활동도 제한합니다 일본의 B 형 간염과 C의 경우는 각각 백만에서 130 만에서 150 만에서 2 백만 사이 인 것으로 추정 되므로이 질병과 관련된 사회적 및 경제적 손실은 매우 클 수 있습니다 이러한 바이러스 간염은 감염 후 약 20 ~ 25 년 후 간경변으로 발생하여 간세포 암종으로 이어지는 것으로 알려져 있습니다 국립 암 센터 (National Cancer Center)가 발표 한 암 통계에 따르면 2004 년 1 차 간암으로 34,507 명이 사망했습니다 간세포 암종 환자의 90% 이상이 B 형 간염 또는 C 바이러스 감염 병력이 있으며 B 감염은 대략 20%를 차지하고 C 바이러스 감염은 대략 70%를 차지한다고보고되었습니다 (그림 1)
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그림 1 : 기술 개발 (간염의 병리와 일치하는 섬유증에 대한 혈청 학적 검색)과 간 질환에서 간염 바이러스의 비율 |
처음에 언급 된 바와 같이, 바이러스 성 간염에서 간경변 및 간세포 암종에 이르는 질병의 진행 정도는 간 조직에서 섬유증의 진행에 의해 추정됩니다 바늘 생검hiscopathological 진단의 직접 평가 외에도 섬유증의 진행과 함께 섬유증이 관찰됩니다혈소판감소 (150,000 미만)를 사용하여 "간접적"으로 평가됩니다 정상 혈청 트랜스 아미나 제 (ALT) 사례에 대한 항 바이러스 치료 지침에 나타난 바와 같이, 혈소판 수가 150,000 미만인 경우,이 사례는 고급 섬유증 환자 인 것으로 추정됩니다 이 경우라이브 생검를 수행하여 확인해야하며, 섬유증 등급 3 (F3) 이하의 경우 만성 간염으로 취급되고 섬유증 등급 4 (F4)가 간경변으로 취급됩니다 섬유증이 진행됨에 따라 간세포 암종의 위험이 더 높으며, 간세포 암종의 빈도는 F3의 경우 연간 3-4%, F4의 경우 매년 7-8%로 발생합니다 암 스크리닝은 섬유증의 진행이 예상되는 경우에도 중요한 열쇠입니다 이러한 임상 병리학 적 상황을 고려할 때, 신체적 부담을 줄이고 간에서 진행되는 섬유증을 직접 측정 할 수있는 시험 방법이 필요하다 이것은 또한 2008 년 "7 년 간염 연구 전략"의 목표로 등장합니다
개발이 진행되었습니다바카라 룰코 실화 질병 마커연구의 배경에서 언급 된 문제를 해결할 수있는 큰 잠재력이 있습니다
AIST의 Glycosylation Engineering Research Center는 2001 년부터 NEDO (New Energy and Industrial and Industrice Technology Development Organization)의 커미션 프로젝트로서 BIO학 개발 기술 연구 협회 (BIO)와 협력하여 Glycan Research를 계속 수행하고 있습니다 2006 년에 시작된 "바카라 룰코 실화 기능 활용 기술 개발"프로젝트 (이하 "MG Project"라고 불림) (프로젝트 리더 Narimatsu Hisashi)는 대학, 임상 연구소, 사립 회사 및 기타 연구 기관을 포함한 38 개의 연구 기관을 포함한 38 개의 연구 기관과의 공동 및 연구를 포함하여 바카라 룰코 실화 기능의 연구 및 개발을 수행하고 있습니다 바카라 룰코 실화 엔지니어링 연구 센터 이 중에서, 우리는 바카라 룰 칸 질환 마커의 발달을 취하고 다양한 암을위한 통합 전략을 사용하여 마커를 얻었습니다 이 연구의 결과는 국제 의료 센터 Kofudai Hospital과 Nagoya City University 사이의 공동 연구에서 얻은 간 질환 마커 개발의 연구 결과입니다
MG 프로젝트는 단순히 질병 또는 질병의 진행으로 병변 세포에 의해 생성 된 바카라 룰코 단백질에 대한 바카라 룰코 단백질의 변화에 기초하여 바카라 룰 칸 질환의 마커로서 정량적 및 질적 변화를 나타내는 바카라 룰코 단백질을보고 검색하고 검색하는 전략을 고안하고 구현했다
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그림 2 암 마커 검색 전략 |
이 전략은 1) 암 조직 및 배양 된 암 세포에 의해 생성 된 바카라 룰 칸 유전자의 발현 프로파일로부터 암 세포에 의해 특징적으로 생성 된 바카라 룰 칸 구조를 유추하고, 동시에, 실제로 생산되고 분비 된 당 단백질 바카라 룰 칸Lectin microarray암 세포가 특징적으로 생산하는 설탕 사슬을 분석하고 반응합니다Lectin대안 적으로, 항-바카라 룰코 실화 항체는 프로브로 선택된다; 2) 선택된 프로브를 사용하여 암 세포 분비 당 단백질 중에서 암성 바카라 룰 칸 (또는 그 단편)을 갖는 당 단백질 그룹을 수집하고;IGOT 메소드와 같은 질량 분석 기반 방법을 사용하여 확인됩니다 3) 환자의 혈청으로부터 확인 된 당 단백질의 정제와 렉틴 어레이 기반 방법 등을 사용하여 바카라 룰 칸 구조의 변화를 다시 확인하는 것은 세 가지 단계에서 발견되었다 : 다수의 잠재적 바카라 룰 칸 질환 마커 이 새로운 전략은 간염 관련 질환에 적용되었으며, 후보 당 단백질 그룹 중에서, 후보자 섬유증의 정도를 반영하는 우수한 당 단백질 마커가 다음 확인 실험에 의해 발견되었다
바카라 룰코 실화 마커 개발을위한 마커 후보 분자 테스트를 위해 2008 년에 유효한 렉틴 마이크로 어레이 기반 기술 (항체 보조 강의 프로파일(ALP))를 설립하고 그 결과를 프로테오믹스 전문 저널로 만들었습니다분자 및 세포 단백질체에 발표되었습니다 이 시스템은 혈액에 존재하는 표적 당 단백질을 쉽게 정제 할 수 있으며 렉틴 마이크로 어레이를 사용하여 바카라 룰 칸 구조를 비교적으로 프로파일 링합니다 주요 특징은 생물학적 성분 및 비교 분석으로부터 수십 개의 Ng의 당 단백질을 쉽게 정제 할 수 있다는 것이다 질량 분석법 및 액체 크로마토 그래피와 같은 기존 기술을 사용한 비교 바카라 룰코 실화 분석의 경우, 적어도 10 μg의 정제 당 단백질이 필요했습니다 이 시스템의 발달로 혈청 단백질의 바카라 룰코 실화를 분석 할 수 있었는데, 이는 혈청, 조직에서 소량으로 존재하고 분석하기가 불가능한 당 단백질의 바카라 룰코 실화를 분석 할 수있게되었다 또한 매우 적은 양을 사용하여 귀중한 임상 표본을 분석하는 것도 가능해졌습니다
이 시스템을 사용하여 당 단백질 분자를 가능하게합니다 (α1 산 바카라 룰코 단백질(AGP))의 바카라 룰 칸 형태의 변화가 간 섬유증의 진행에 대해 비 침습적으로 검사 할 수있는 마커인지 여부를 조사했다 AGP는 간염, 간경변, 간암 및 건강한 개인 5 명 환자에 대해 05 μL의 혈청으로부터 단순히 정제되었으며, 비교 바카라 룰 칸 분석은 렉틴 마이크로 어레이를 사용하여 수행되었으며, 신호로 얻은 렉틴 중에서 비 -LC (만성 간염 및 건강한 대상체) 및 LC에서 유의 한 변화를 나타내는 6 개의 렉틴 중에서도 실시되었다 따라서, 우리는 간염 바이러스로 고통 받고 간 생검으로 섬유증 (단계)의 병리학 적 진단을받은 125 명의 환자 (33 건의 F1, 32 건의 F2 사례, 31 건 및 F4 : 29 사례)를 분석했으며, 간 섬유증의 진행과 통계적으로 가장 상관 관계가있는 추가 선택된 렉틴을 분석했습니다 결과는 두 가지 유형의 렉틴 (AOL, MAL)에서 F3과 F4 사이에 유의 한 차이가 있음을 보여 주었다 즉, 만성 간염과 간경변을 구별한다
이 두 렉틴의 맹인 검사는 만성 간염이있는 45 명의 임상 진단 환자와 간경변 환자 43 명에서 수행되었습니다 결과적으로 AOL은 힘입니다감도86%,특이성91%,사법 시험 요금89%, MAL은 91% 감도, 89% 특이성 및 90% 정확한 진단 속도였다 두 개의 신호가 결합 될 때, 간경변 검출의 가장 정확한 결과를 얻었으며, 95%의 민감도, 91%의 특이도 및 올바른 진단 률은 93%입니다 상기로부터, 다수의 렉틴 (AOL, MAL) 및 AGP 항체가 사용된다샌드위치 면역 감각를 결합함으로써, 바이러스 성 간염 환자들 사이에서, 높은 정확도가있는 간경변 환자는 높은 감도, 91%의 특이성 및 93%의 정확한 진단 속도로 둘러싸여있는 것으로 밝혀졌다 이 수치는 이전에보고 된 푸코스-인식 렉틴 AAL 및 AGP 항체를 사용하여 샌드위치 검출 방법을 사용하여보고 된 정상 속도 (<80%)를 유의하게 초과했으며, 기존 혈청 마커의 결과를 능가했다 (도 3)
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그림 3 바카라 룰 칸 질환 마커의 식별 및 섬유증의 진행 상황을 포착하는 마커의 예 |
더 많은 사람들이 이용할 수 있도록 "실험실 수준 탐지 시스템"에서 "지역 병원의 임상 실험실에서 사용할 수있는 탐지 시스템"으로 개발하고 있습니다 개발이 진행됨에 따라 여러 임상 기관에서 수집 한 많은 수의 표본을 분석 할 수 있습니다 이를 통해 얻은 바카라 룰 칸 질환 마커의 신뢰성과 다양성을 검증하고 임상 시험으로 실질적인 사용을 달성 할 수 있습니다