국립 고급 산업 과학 기술 연구소 (Yoshikawa Hiroyuki 회장) (이하 "온라인 바카라") 생물 장애 공학 연구 부서 [Iwakura Masahiro 회장] Biomajor Research Group [Sekiguchi I -Wachi] Noda Naohiro 연구원의 회장 및 엔지니어링 교수와 Scienge of the Scoundor and and Enginaing의 연구원 과학 연구원 Shirai Katsuhiko], Waseda University 대학원 Tani Hidenori 및 J-Bio21 Co, Ltd, Kurada Nobuya 이사 및 기술 부서 (ABC-램프 온라인 바카라)
DNA를 정량화하기위한 기술은 SARS 및 조류 인플루엔자 바이러스와 같은 시민의 삶을 위협하는 인간 질병 진단, 바이러스의 탐지 및 정량화를 목표로하는 유전자 발현 분석에 사용되며, 재조합 콩과 같은 유전자 변형 식품의 오염율을 테스트하여 매우 사회적 필수품을 만들어냅니다
이번에 개발 된 기술은 DNA GuaninebaseAB-QPROBE) 및 알려진 농도내부 표준을위한 DNA를 결합하여 정확한 DNA 정량화를 달성 하였다 DNA 증폭 반응 전후에 한 번 이상 형광을 한 번 측정함으로써, 표적 DNA를 정량화하여 DNA 정량화를 간단하고 저렴한 비용으로 만들 수있다 (도 1) 이전 기술과 비교할 때이 기술의 장점은 다음과 같습니다 1) 실시간으로 형광 증폭 공정을 측정 할 필요가 없습니다 2) 겔 전기 영동 필요 없음, 3) 비싸실시간 PCR장치가 필요하지 않음; 4) DNA 증폭 반응을 억제하는 물질의 효과에 덜 취약하다
이 기술에 대한 자세한 내용은 미국 화학 학회를 참조하십시오분석 화학곧 잡지 디지털 에디션에서 출시 될 예정입니다
그림 1 새로운 기술 ABC-LAMP 온라인 바카라의 개요 및 기존 온라인 바카라과의 비교 |
유전자를 정량화하는 기술 (DNA)을위한 기술 (DNA)은 SARS, 조류 인플루엔자 바이러스와 같은 인간 질병 진단에 대한 유전자 발현 분석에 사용되며, 사람들의 삶을 위협하는 사람들과 같은 사람들의 삶을 위협하는 바이러스를 감지하고 정량화하는 데 사용됩니다 재조합 콩
지금까지, 정량적 PCR 온라인 바카라 중 하나 인 실시간 PCR은 미생물, 식물 및 식물에 함유 된 DNA를 정량화하는 데 사용되었습니다 실시간 PCR 온라인 바카라은 PCR에 의해 DNA가 증폭되고 증폭 된 생성물의 양은 표적 DNA를 정량화하기 위해 PCR의 한 사이클마다 측정되는 기술이다 증폭 생성물의 형광의 양은 매기마다 측정해야하므로 다음과 같은 문제가 있습니다 1) 형광 측정 장치와 PCR 열 사이클러를 결합한 비용이 많이 드는 실시간 PCR 장치; 2) 고 처리량 (고속, 대규모 처리)에 한계가 있으며 3) DNA 증폭 반응을 억제하는 물질이 존재할 때 정량적 값을 과소 평가할 수 있습니다
위의 문제를 극복하는 단순하고 저비용, 고 처리량 및 정확한 DNA 정량화 온라인 바카라은 생명 과학뿐만 아니라 환경, 농업 및 식품 분야를 포함한 다양한 분야의 개발에도 바람직합니다
온라인 바카라는 간단하고 저비용, 고 처리량 및 정확한 DNA 정량화 기술의 개발을 촉진 해 왔으며 온라인 바카라, Waseda University 및 J-Bio21 Co, Ltd는 형광 소화전 현상을 활용하는 새로운 DNA 정량화 기술을 개발하기 위해 노력하고 있습니다 그 과정에서, 우리는 구아닌 염기와의 특정 상호 작용으로 인해 형광을 켄 칭하는 형광 염료 와이 방법에 특화된 내부 표준 DNA를 사용하여 독특한 방법에 의해 고유 한 유전자 서열을 갖는 내부 표준 DNA를 사용하여 새로운 DNA 정량화 방법을 성공적으로 개발 하였다
이 연구는 New Energy and Industrial 및 Industrial 기술 개발 기관의 2006 Industrial Technology Research Grant 프로젝트의 지원으로 수행되었습니다
새로운 기술은 구아닌 염기와의 특정 상호 작용으로 인해 형광을 켄 칭기하는 염료로 표시된 프로브입니다 (대안 적으로 켄칭 프로브: AB-QPROBE) 및 내부 표준 DNA가 사용됩니다 이것은 유전자 증폭 반응 전후의 형광을 측정함으로써 표적 DNA를 단순히 정량화 할 수있게한다 (도 1) 새로운 기술에는 4 가지 기능이 있습니다 1) 실시간 PCR 온라인 바카라과 같이 PCR의 단일주기마다 형광을 측정 할 필요가 없습니다 2) 겔 전기 영동이 필요하지 않음, 3) 비싼 실시간 PCR 장비, 4) DNA 증폭 반응을 억제하는 물질에 의해 영향을받을 가능성이 적어 정확한 정량화를 허용합니다
또한이 연구에서 위의AB-QPROBE내부 표준 DNA를 사용한 기술은 등온 DNA 증폭 온라인 바카라 램프 (루프 매개 등온 증폭) 온라인 바카라과 결합하여 단순하고 정확하며 저렴한 DNA 정량화 온라인 바카라 (교대로 프로브 경쟁력 램프: ABC-LAMP)가 개발되었습니다
이 기술에서, 대상 DNA를 측정하고 내부 표준에 대한 DNA 및AB-QPROBE를 사용하여 수행된다AB-QPROBE말단에 형광 표지 된 C베이스가 있으며, 이는 표적 DNA의 G 염기를 만날 때 켄칭합니다 한편, 내부 표준에 대한 DNA는 표적 DNA와 동일한 효율로 증폭되지만, 증폭 생성물에 결합 된 프로브의 형광이 켄칭되는 것을 방지하기 위해, DNA 가닥은 보체 부분 (프로브가 결합 된 부분)이 G베이스가 아닌 C베이스의 끝에 인공적으로 합성되며, 내부 표준으로 사용된다AB-QPROBE동일한 결합력을 갖는 내부 표준 DNA로부터 유래 된 표적 DNA 및 증폭 생성물에 경쟁적으로 결합하지만, 형광 켄칭의 강도는 결합 된 것에 따라 변화한다 (도 2) 급연 강도의 이러한 차이를 사용하여, 램프 반응 전후 형광을 측정함으로써 표적 DNA를 정량화 할 수있다 (도 3)
그림 2대안 적으로 켄칭 프로브Quension Pattern Overview |
그림 3 ABC-LAMP 온라인 바카라에 의한 유전자 정량 개요 |
이 연구에 사용 된 램프 온라인 바카라 외에도 이미 널리 사용되는 PCR 온라인 바카라이 있으며 특히 RNA를 증폭시킵니다NASBA(핵산 서열 기반 증폭) 법등도 개발 및 사용되었지만,이 기술은 반응 전후 형광 측정에 의해 표적 DNA (NASBA 온라인 바카라의 경우 RNA)를 정량화하기 때문에 이러한 증폭 온라인 바카라과 쉽게 결합 할 수 있으며 추가 개발이 예상됩니다
이 기술 사용암모니아 산화 박테리아이 기술은 기존의 온라인 바카라과 동일한 정확도와 재현성을 가지고 있음을 밝혀 냈습니다 또한, 기존의 온라인 바카라은 DNA 증폭 반응을 억제합니다습기 산우레아 농도는 증가함에 따라 실제 값보다 낮은 것으로 나타 났으며, 본 기술은 험미 산 또는 우레아 농도에 의존하지 않고 표적 DNA의 정확한 정량화를 허용했다
우리는이 기술을 인간 질병 진단 등에 대한 유전자 발현 분석에 적용하고 SARS, 조류 인플루엔자 바이러스 등의 정량적 탐지를 목표로합니다
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J-Bio21은 현재이 온라인 바카라에 최적화 된 저렴한 형광 측정 장치를 개발하고 있습니다