게시 및 게시 날짜 : 2014/02/17

재생 의학에 사용되는 바카라 필승법의 안전성을 위해 배양 배지로 테스트 할 수 있습니다

-이식 바카라 필승법에 남아있는 인간 IPS 바카라 필승법 및 인간 ES 바카라 필승법를 검출하기위한 테크니크-

포인트

  • 인간 IPS 바카라 필승법 및 인간 ES 바카라 필승법로부터 배양에서 분비 된 당 단백질 마커 발견
  • 이식을 위해 생성 된 바카라 필승법를 손상시키지 않고 바카라 필승법 배양 용액을 사용하여 감지 할 수 있습니다
  • 인간 IPS 바카라 필승법 및 인간 ES 바카라 필승법를 사용하여 재생 의학의 안전성 향상에 기여하기를 희망

概要

8145_8378차별화's PersonIPS 바카라 필승법YojinES 바카라 필승법(이하 "인간 ips/es 바카라 필승법"라고 함)를 쉽게 감지하기 위해 기술이 개발되었습니다

미분화 된 인간 IPS/ES 바카라 필승법는 인간 IPS/ES 바카라 필승법로부터 분화함으로써 생성 된 이식 바카라 필승법에 남아있을 수 있으며, 이들 미분화 된 인간 IPS/ES 바카라 필승법가 종양 형성으로 변하는 위험은 인간 IPS/ES 바카라 필승법를 의학적 응용에 적용하는 데 가장 큰 장벽이다 이번에 개발 된 기술을 통해 우리는 귀중한 이식 바카라 필승법를 낭비하지 않고 검사함으로써 인간 IPS/ES 바카라 필승법의 안전성을 미리 이해할 수 있습니다 인간 IPS/ES 바카라 필승법 사용재생 의학안전 개선에 기여할 것입니다 이 기술에 대한 자세한 내용은 "과학 보고서"(Sci 대표 4, 4069에서 온라인으로 게시)

배양 배지에서 이식 바카라 필승법에 남아있는 인간 ips/ES 바카라 필승법의 검출 그림
그림 1 : 이식 바카라 필승법에 남아있는 인간 IPS/ES 바카라 필승법는 배양 배지에서 검출됩니다

개발의 사회적 배경

인간 IPS/ES 바카라 필승법는 다양한 바카라 필승법 (다 능성)로 분화하는 능력과 자신의 자체 재생 능력과 동일한 성질의 바카라 필승법를 분열하고 증가시키는 능력이 있으므로 재생 의학의 바카라 필승법 물질로서 큰 약속이 있습니다 한편, 인간 IPS/ES 바카라 필승법를 사용하여 재생 의학에서 해결해야 할 가장 큰 문제는 인간 IPS/ES 바카라 필승법가 인간 IPS/ES 바카라 필승법로부터 분화하여 제조 된 이식 바카라 필승법에 남아있는 경우 종양을 형성 할 위험이 있다는 것이다 환자에 대한 위험을 최소화하기 위해서는 실제로 이식 치료를 수행하기 전에 이식 가능한 바카라 필승법에 얼마나 많은 인간 IPS/ES 바카라 필승법가 남아 있는지 확인하기 위해 품질 검사가 필요합니다 따라서, 이식 된 바카라 필승법에 남아있는 인간 IPS/ES 바카라 필승법의 수를 측정하기위한 기술을 개발할 필요가있다

하지만,유바카라 필승법 분석법yaQRT-PCR Method와 같은 기존의 기술에서, 생성 된 이식 바카라 필승법 중 일부는 파괴되어 테스트에 사용되어야했다 이 문제를 해결하기 위해, 바카라 필승법 자체를 사용하지 않고 이식 바카라 필승법에 약간 혼합 된 인간 IPS/ES 바카라 필승법를 쉽게 감지 할 수있는 새로운 기술을 개발할 필요가있다

연구 이력

AIST는 재생 의학을 촉진하고 확산시키는 글로벌 표준이되었습니다幹細胞Lectin microarray고농도로 바카라 필승법 표면을 덮는다포도당 체인| 줄기 바카라 필승법 표적마커 (표시기)를 개발하기 위해 노력하고 있습니다

이의 일환으로, 우리는 Wako Pure Chemical Industries와 공동 연구를 수행했습니다Lectin유형입니다RBC2LCN를 발견했습니다 인간 IPS/ES 바카라 필승법에 구체적으로 결합하고, RBC2LCN은 인간 IPS/ES 바카라 필승법가 살아있는 인간을 염색 할 수있다 또한, RBC2LCN은 인간 IPS/ES 바카라 필승법의 유형이다Podocarixin| 특정O설탕 사슬을 입력결합 된 것으로 밝혀졌다 (AIST : 인간 바카라 사이트 세포를 살아남을 수있는 프로브)

이 연구 및 개발은 AIST 및 WAKO Pure Chemical Industries가 Wako Pure Chemical Industries의 자금 조달 공동 연구 (2011 년)를 통해 공동으로 수행했습니다

연구 컨텐츠

이번에는 인간 IPS/ES 바카라 필승법의 특징입니다O유형 글리 칸을 갖는 podocarixin (H3+podocarixin)은 다양한 유형의 인간 IPS/ES 바카라 필승법로부터 배양 배지로 분비되는 것으로 밝혀졌다 반면에, podocarixin은 또한 신장과 같은 다른 조직에 존재하지만, 우리가 볼 수있는 한, 인간 ips/es 바카라 필승법의 특징 인 H3+podocarixin은 정상적인 체바카라 필승법에서 분비되지 않습니다 즉, 배양 배지에서 H3+podocarixin을 검사함으로써, 인간 IPS/ES 바카라 필승법는 바카라 필승법 자체를 사용하지 않고 검출 될 수있다

일반적으로, 단백질은 독특한 아미노산 서열을 인식하는 항체를 사용하여 검출되지만, podocarixin은 양이 큽니다O型糖鎖で覆われた巨大なmucin이기 때문에 항체를 사용할 수 없었습니다 따라서, 우리는 H3+podocarixin에 풍부한 독특한 글리 칸 구조에 초점을 맞추고O유형 글리 칸을 인식하는 두 가지 유형의 렉틴을 사용한 새로운 탐지샌드위치 분석를 사용하여 검출 시스템을 고안했습니다 시스템 (그림 2) 자세한 방법은 다음과 같습니다

① h3+podocarixin을 판별 적 시약으로 인식하는 고정화 된 RBC2LCN으로 반응 용기를 준비합니다
② 반응 용기에 바카라 필승법 배양 배지의 한 방울 (50 μl)을 1 시간 동안 1 시간 동안 h3+podocarixin을 흡수합니다
③ 바카라 필승법 배양 배지를 세척하고 제거한 후 RBC2LCN과 분리되어 있습니다O유형 Glycans 인식酵素標識 Raba반응 용기에 1 시간 동안 흡착 된 H3+podocarixin과 반응한다
④ 효소-표지 된 라바가 개발되며, 그 색의 강도는 H3+podocarixin의 양을 결정하기 위해 측정됩니다
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이번에 개발 된 검출 시스템의 주요 점은 먼저 인간 IPS/ES 바카라 필승법로부터 반응 용기로 분비 된 H3+podocarixin 만 먼저 선택적으로 흡착하고, 둘째, H3+podocarixin의 하나의 분자에서 100 이상으로 예상되는 구조를 갖는 것입니다O유형 글리 칸을 검출 시약으로 인식하는 Raba를 사용함으로써 고감도 검출은 많은 효소를 하나의 H3+podocarixin에 부착함으로써 달성되었다 다시 말해, 두 가지 유형의 렉틴을 사용함으로써 선택성과 높은 감도가 모두 달성된다

이번에 개발 된 탐지 시스템을 사용하여 많은 표본을 빠르게 테스트 할 수 있습니다 (3 시간 미만) 또한, 천만 바카라 필승법가 배양 배지 10 ml에서 배양 될 때, 5,000 (005%) 이상의 인간 IPS/ES 바카라 필승법가 검출 될 수있다 이식 바카라 필승법에서 인간 IPS/ES 바카라 필승법의 오염 속도가 측정 될 수 있기 때문에, 인간 IPS/ES 바카라 필승법를 사용한 재생 의학에 대한 안전성 평가 방법이 될 수 있기 때문이다

이번에 개발 한 인간 IPS/ES 셀의 원리 다이어그램
그림 2 : 이번에 개발 된 인간 IPS/ES 셀 탐지 시스템의 원리 다이어그램

미래 계획

이 기술은 실제 재생 의학에 사용되는 인간 IPS/ES 바카라 필승법로부터 유래 된 이식 바카라 필승법의 안전성을 평가하는데 사용되며, 인간 IPS/ES 바카라 필승법를 사용한 재생 의학의 촉진에 기여한다 또한이 회사는이 기술의 민감도와 정량적 특성을 개선하고 재생 의학 분야에서 널리 사용될 임상 테스트 장비를 개발할 계획입니다

문의

독립 행정 기관, 국립 선진 산업 과학 기술 연구소
줄기 바카라 필승법 공학 연구 센터, 글리코 실화 렉틴 엔지니어링 연구 팀
최고 연구원 Tateno Hiroaki 이메일 : h-tateno * aistgojp ( @로 변경하고 보내주세요)
교장 연구원 및 연구 팀 Hirabayashi Jun 이메일 : Jun-Hirabayashi * aistgojp ( @로 변경하고 보내주세요)



터미널 설명

◆ 차별화
유기체의 발달 과정이 바카라 필승법, 조직, 장기 및 개체를 형성하고 전문화하는 과정[참조로 돌아 가기]
◆ ES 바카라 필승법
배아 줄기 바카라 필승법(배아 줄기 바카라 필승법)는 초기 인간 발달로부터 난의 내부 바카라 필승법 질량의 인위적 배양 산물입니다 그는 자신과 동일한 특성을 가진 무한한 바카라 필승법를 만들 수 있고 모든 조직으로 구별 할 수있는 능력이 있습니다[참조로 돌아 가기]
◆ IPS 바카라 필승법
유도 다 능성 줄기 바카라 필승법(유도 다 능성 줄기 바카라 필승법) 피부 및 혈액 바카라 필승법와 같은 분화 된 바카라 필승법에 여러 유전자를 도입함으로써 인위적으로 생성 될 수 있습니다 ES 바카라 필승법와 마찬가지로, 그들은 자체와 동일한 특성을 가진 무한한 수의 바카라 필승법를 생성하고 모든 조직으로 구별 할 수있는 능력을 갖습니다[참조로 돌아 가기]
◆ 재생 의학
환자의 신체 외부에서 인공적으로 준비된 바카라 필승법와 조직을 이식하여 부상 또는 질병으로 손상된 조직 및 기관을 재생하는 치료 치료, 손실 된 인체 기능을 회복시킵니다[참조로 돌아 가기]
◆ 유바카라 필승법 분석법
고속으로 용액에 매달린 바카라 필승법의 산란 된 빛 및 형광을 측정하는 방법 다량의 바카라 필승법의 특성을 분석하는 데 종종 사용되는 일반적인 기술[참조로 돌아 가기]
◆ QRT-PCR 방법
정량적 역전사 폴리머 라제 연쇄 반응약어 (역전사 폴리머 라제 연쇄 반응) 주형으로서 RNA를 사용하여 역전사에 의해 DNA를 정량화하고, PCR을 사용하여 생성 된 cDNA를 증폭시키는 방법 검사 할 유전자의 양을 정량적으로 분석하는 일반적인 방법[참조로 돌아 가기]
◆ 줄기 바카라 필승법
다수의 바카라 필승법 (다 능성)로 분화하는 능력이있는 바카라 필승법 (바카라 필승법 분열 후에도 다형 잠재력을 유지하는 능력) (자기 재생 능력)[참조로 돌아 가기]
◆ Lectin microarray
동일한 기판 (예 : 슬라이드 유리)에서 상이한 당 결합 특이성을 갖는 다수의 렉틴을 고정시킴으로써 제조 된 단백질 마이크로 어레이 다수의 렉틴의 반응 패턴으로부터 샘플에 존재하는 글리 칸 프로파일 링 기술 정제 된 글리 칸 및 당 단백질뿐만 아니라 혈청, 바카라 필승법 및 조직과 같은 생물학적 샘플을 분석 할 수 있습니다 암 및 줄기 바카라 필승법 진단 기술 개발에 매우 효과적입니다[참조로 돌아 가기]
◆ 糖鎖
단당류 연결에 의해 형성된 화합물 그룹을 보여준다 그것은 설탕뿐만 아니라 단백질 및 지질과도 복합체를 형성하여 다양한 분자를 형성합니다 그것은 고농도의 모든 바카라 필승법 표면을 덮고 있으며, 이들의 구조는 유기체, 조직 및 바카라 필승법가 시작된 바카라 필승법에 따라 다르므로 "바카라 필승법 얼굴"이라고하며 바카라 필승법와 질병을 구별하기위한 마커로 효과적입니다 바카라 필승법 대 바카라 필승법 신호 전달을 매개함으로써 다양한 생명 현상에 관여하는 것으로 알려져있다[참조로 돌아 가기]
◆ 마커 (표시기)
질병 진단 및 바카라 필승법 식별을위한 지표 암 마커, 질병 마커, 미분화 마커, 줄기 바카라 필승법 마커 등이 있습니다[참조로 돌아 가기]
◆ Lectin
글리 칸에 결합하고 인간에서 바이러스에 이르기까지 모든 유기체에 존재하는 단백질에 대한 일반적인 용어 러시아 스틸 마크 (Russian Stillmark)는 1888 년에 캐스트터 씨앗의 추출물이 다양한 동물로부터 혈액 바카라 필승법를 집계 한 것을 발견 한 것은 이번이 처음이었다 설탕 사슬에 결합함으로써 다양한 생명 현상에 깊이 관여한다는 것이 분명 해지고있다[참조로 돌아 가기]
◆ RBC2LCN
그램 음성 박테리아Burkholderia cenocepacia에서 렉틴 BC2L-C의 N- 말단 도메인에서의 재조합 단백질 비록 미분화 된 IPS 바카라 필승법 및 ES 바카라 필승법와 반응하지만, 분화 된 체바카라 필승법와 전혀 반응하지 않아서 미분화 된 인간 IPS 바카라 필승법를 검출하기위한 검출 시약으로서 효과적이다[참조로 돌아 가기]
◆ Podocarixin
막 단백질의 유형, 고도로O글리코 실화 된 유형 설탕 사슬 등으로 변형된다O유형의 글리 칸이 있습니다[참조로 돌아 가기]
O설탕 사슬을 입력
단백질의 세린 또는 트레오닌 잔기에 결합 된 글리코 단백질의 글리코 실화 사슬 대조적으로, 단백질의 아스파라긴 잔기에 결합 된 당 사슬은n유형 설탕 사슬이라고합니다[참조로 돌아 가기]
◆ mucin
동물 상피 바카라 필승법 등으로부터 분비 된 점성 물질 podocarixin은 뮤신 유사 단백질의 한 유형입니다[참조로 돌아 가기]
◆ 샌드위치 분석
두 가지 유형의 검출 분자 사이에 특정 분자를 검출하는 방법에 대한 일반적인 용어 검출 분자로서 두 가지 유형의 항체를 사용하는 항체-항체 샌드위치 분석이 가장 흔하며 종종 질병 진단에 사용됩니다[참조로 돌아 가기]
◆ 효소 라벨이 Raba
버섯 (Agaricus bisporus)-렉틴 ABA의 유래 재조합 단백질은 퍼 옥시 다제라는 효소로 표지되어있다 기판을 추가하면 진한 파란색이됩니다[참조로 돌아 가기]

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